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    6-磷酸葡萄糖脱氢酶(GPDH)试剂盒说明书

    阅读次数:900  发布时间:2019/3/11 17:00:50
     6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)试剂盒说明书

    分光光度法 50 /48 

    正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

    测定意义:

    G6PDHEC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP+还原为NADPH,供

    生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程

    度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。

    测定原理:

    G6PDH 催化NADP+还原生成NADPH,在340 nm 下测定NADPH 增加速率。

    需自备的仪器和用品:

    紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸

    馏水。

    试剂的组成和配制:

    提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;

    试剂一:液体47.5 mL×1 瓶,4℃保存;

    试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存;

    试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;

    样本的前处理:

    1、细菌、细胞或组织样品的制备:

    细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量

    104 个):提取液体积(mL)为1000~5000:1 的比例(建议2000 万细菌或细胞加入1mL

    提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30

    次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

    组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,

    加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

    2、血清(浆)样品:直接检测。

    测定步骤:

    1、分光光度计预热30min 以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

    2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)

    水浴10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

    3、在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 试剂一,混匀后立即记录340nm 1min

    后吸光值A1  6min 后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1

    注意:ΔA 大于0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应

    时间缩短至2min,使A2-A1 小于0.5,可提高检测灵敏度。

    原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司


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