果胶酶活性检测试剂盒注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 规格:100T/48S 产品内容: 提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。 试剂一:液体25mL×1 瓶,4℃保存。若溶液中有不溶解物质,可以50℃水浴溶解。试剂二:液体20mL×1 瓶,4℃避光保存。 标准品:粉剂×1支,10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL蒸馏水,配成50mol/mL的标准 果胶酶活性检测试剂盒产品说明: 果胶酶(pectinase)是分解果胶的酶类,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于高等植物果实和微生物中,是水果加工中*重要的酶。 果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。 可见分光光度计/酶标仪、台式 离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 果胶酶活性检测试剂盒操作步骤: 一、粗酶液提取: 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。 菌类:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g, 4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。 液体:直接检测。 二、测定步骤: 1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。 2、将 50µmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、8、6、4、2、1µmol/mL 的标准溶液备用。 3、取 40µL 样本沸水浴 10min 备用。 4、操作表:(在 1.5mL 离心管中) 三、果胶酶活性计算 1、标准曲线的绘制: 以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的△A标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将△A带入方程得到x(µmol/mL) 2、果胶酶活性的计算: (1)按蛋白浓度计算 酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。 果胶酶活性(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T= 2x÷Cpr。 (2)按样本质量计算 酶活定义:在50℃,pH3.5 条件下,每克样品每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。 果胶酶活(U/g 鲜重)= x×V 提取÷W÷T=2x÷W。 (3)按照细胞数量计算 酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每104个细胞每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。 果胶酶活(U/104 cell)=x×V提取÷T÷细胞数量(万个)=2x÷细胞数量(万个)。 (4)按液体体积计算 酶活定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每mL样本每小时分解果胶产生1µmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。 果胶酶活(U/mL)= x×V 样÷V 样÷T= 2x。 V 提取:提取液体积,1mL;V 样:加入的样品体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间:0.5h。 果胶酶活性检测试剂盒注意事项: 1、A大于1.5 时,建议将样品稀释后再进行测定。 2、植物果实组织建议将样本稀释10倍或20倍后再测定。 原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司 |