规格：100管/96样
微量法
注意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体 摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。 测定原理： 在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。 试剂组成和配制： 提取液一：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。 提取液二：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。 提取液三：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。 粉剂四：粉剂 100 mg ×1 支，室温保存。 试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。 样品处理： 称取样品约0.5 g，破碎，加入0.5 mL提取液一，沸水浴15min，冷却至室温，加入0.5mL提取液二，震荡摇匀，加0.5 mL提取液三，用镊子加少量粉剂四（约 1 mg），静置30min，25℃，8000g 离心15 min，取上清液待测。 测定步骤和操作表： 1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、操作表
| | 空白管 | 测定管 | | 样品（µL） | | 100 | | 试剂一（µL） | 100 | 100 | | 试剂二（µL） | 100 | 100 | | H2O | 100 | | | 混匀，25℃静置15min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中检测540nm处吸光值。 ΔA=A测定-A空白
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注意：空白管只需测定一次。
亚硝酸盐含量计算： a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线回归方程为：y=0.011x+0.0216，R2=0.9991 NO2-（μ moL/g）=（ΔA-0.0216）÷0.011×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3 =0.409×（ΔA-0.0216）÷W V 样总：加入提取液体积，1.5 mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，0.1mL；W：样品质量，g。 b.用96孔板测定的计算公式如下 标准曲线回归方程为：y=0.0055x+0.0216，R2=0.9991 NO2-（μ moL/g）=（ΔA-0.0216）÷0.0055×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3 =0.818×（ΔA - 0.0216）÷W V 样总：加入提取液体积，1.5 mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，0.1mL；W：样品质量，g。 注意事项： 1. 试剂盒2-8℃保存。 2. 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。 3. 若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540<0.01浓缩，A540 > 2.8适当稀释）。 4. 低检出限为1.97μmoL/g。 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
