产品简介：斐林试剂(Fehling＇s Reagent)又称菲林试剂或裴林试剂，是德国化学家 Hermann von Fehling 1849 年所发明，斐林试剂与班氏试剂(Benedict＇s Reagent)相似，均是用来检测还原糖的存在，其原理是与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。 还原糖检测试剂盒(斐林微板法)主要由酒石酸钠钾、硫酸铜等组成，其测定原理是还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的 Cu2+还原成 Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色程度与溶液中还原糖含量成正比，在 590nm 下可用比色法测定吸光度，查标准曲线即可计算出样品中还原糖的含量，主要用于含淀粉食品、酒精饮料、碳酸饮料、肉制品、蜜饯等食品和植物等样品中还原糖的定量检测；总糖的含量也可以测定， 但需要提水解后才能检测，也可用于还原糖的定性试验。该试剂盒仅用于科研域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料： 1、试管或离心管 2、锥形瓶、容量瓶、玻璃珠 3、水浴锅或酒精灯 4、果糖、转化糖等还原糖标准(1mg/ml) 5、盐酸水溶液、氢氧化钠溶液 6、10%乙酸铅溶液、饱和硫酸钠溶液 7、蒸馏水、碘液 8、酶标仪、96 孔板 操作步骤(仅供参考)： 1、配置斐林试剂：Fehling＇s Reagent A 液和 B 液等比例混合即成，不可久置。2、配制 pH 中和液(1×)：pH 中和液(10×)和水按 1:9 比例混合即成。 3、样品中还原糖的提取： 1) 固体样品(如含淀粉食品、植物样品等)：称取粉碎或混匀后的试样 10~20g（准确到 0.01g），置 250ml 容量瓶中，当体积接近 150ml 时，滴加 1~3 滴甲基红指示剂，如呈红色，可用pH 中和液调至微黄色；若用风干样品，可称取 3g，直接加入容量瓶，加入少量水湿润后， 再加水至 150ml 左右加入指示剂和中和液；将容量瓶置于 80℃的恒温水浴中保温 30min， 期间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对于含蛋白质较多的样品，此时可加入乙酸铅溶液除 去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加入饱和的硫酸钠溶液除去多余的铅离子。30min 后取出冷却并定容至刻度，摇匀后取滤液备用。 2) 酒精饮料：称取混匀后的试样 100g（准确到 0.1g），置于蒸发皿上，滴加 1~3 滴甲基红 指示剂，用 pH 中和液调至微黄色，在水浴上蒸发至原体积的 1/4 后，移入 250ml 容量瓶中，置于 80℃的恒温水浴中保温 30min，期间摇动数次，含蛋白质较多的样品参考上述方法，滤液备用。 3) 碳酸饮料：称取混匀后的试样 100g（准确到 0.1g），置于蒸发皿上，在水浴上微微搅拌除去二氧化碳后，移入 250 容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，并入容量瓶，加水至刻度，混匀后备用。 4) 总糖的水解和提取：称取植物样品 0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约 3ml 匀浆，转移至三角烧瓶中，用 12ml 蒸馏水冲洗研磨器 2~3 次，冲洗液也转移至烧瓶中；向三角烧瓶中加入10ml 6M 盐酸溶液，摇匀，煮沸 30min，并不时搅拌；取 2 滴加于小离心管中，再滴加 1 滴碘液，检查水解是否充分，如已经水解充分，则不显示蓝色；水解完毕后，冷却至室温， 滴加 6M 氢氧化钠溶液，使溶液 pH 接近中性；含蛋白质较多的样品参考上述方法；滤液或上清液用蒸馏水定容至 100ml，混匀，取 10ml，用蒸馏水定容至 100ml，摇匀备用。
附录：还原糖的定性试验1、配制斐林试剂工作液：临用，取适量 Fehling＇s Reagent A 和 B 等量混合即成，即配即用。 2、向洁净试管中加入 1~2ml 待测样品。 3、向该试管中加入 1ml 斐林试剂工作液，充分摇匀。 4、将上述混合液置于沸水浴中，并持续 1～3min。 5、观察试管内混合液颜色是否发生变化，其颜色变化顺序应为浅蓝色-棕色-砖红色(沉淀)。
注意事项： 1、样品提取液中还原糖浓度过高时，应适当稀释后再行测定。 2、样品提取液中还原糖浓度过低时，可提高样品的浓度或增加提取液的用量。 3、可合理减少或增加提取液和斐林试剂的用量。 4、斐林试剂的 A、B 液须分开储存，临用按要求混合使用。 5、斐林试剂 B 液呈强碱性，需小心操作。
6、6M 盐酸配制：用市售盐酸和蒸馏水或去离子水等比例混合即成 6M 盐酸，该过程会放热，应小心操作，避免伤人。
7、6M 氢氧化钠配制：称取氢氧化钠 24g 溶解于蒸馏水，补至 100ml 即成；氢氧化钠溶于水会放热，应小心操作，避免伤人。
8、色素对糖类的测定存在干扰，当提取液颜色较深时，应事先脱色后再进行测定；不同样品脱色方法和脱色剂用量不同，需自行查找文献资料，5%活性炭可用于红葡萄酒的脱色。 9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6 个月有效 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
