主要用途
组织氧化型谷胱甘肽（GSSG）浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针邻苯二甲醛，在还原型谷胱甘肽淬灭清除剂的预处理后，由还原剂的作用，将氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，然后特异性地反应，产生强烈荧光，即采用荧光法来测定组织裂解萃取样品中氧化型谷胱甘肽含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等）氧化型谷胱甘肽的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，重复性好。
保存方式 保存还原液（Reagent G）、染色液（Reagent I）和标准液（Reagent K）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；去干扰液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效期 6月 用户自备 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5毫升离心管：用于样品和标准品制备的容器 DOUNCE匀浆器：用于裂解组织 微型台式离心机：用于样品处理 比色皿：用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪：用于样品荧光分析 实验步骤 一、样品准备 1． 手术取出动物组织，并秤重以确定100毫克组织重量 （注意：建议使用生理盐水和抗凝剂灌注，以去除组织中残留血液） 2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管 3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次 4． 即刻用刀片切碎组织 5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管 6． 加入xx微升预冷的裂解液（Reagent B） 7． 涡旋震荡5，充分混匀 8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器 9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下） 10． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管 11． 加入预冷的xx微升去干扰液（Reagent C） 12． 涡旋震荡5，充分混匀 13． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g 14． 小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管 15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1） 16． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用（建议不宜保存4周以上） 二、标准样品配制 1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管 2． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent D）到1至5号管 3． 加入xx微升标准液（Reagent K）到1号管，混匀 4． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent K）到2号管，混匀 5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent K）到3号管，混匀 6． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent K）到4号管，混匀
三、 样品背景对照测定 测定开始，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。缓冲液（Reagent D）室温预热；然后移出xx微升稀释液（Reagent K）到1管染色液（Reagent J）管里，混匀后， 置于冰槽里，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。 1． 移取xx微升缓冲液（Reagent D）到新的比色皿 2． 加入xx微升淬灭液（Reagent E） 3． 加入10微升上述配制的待测样品 4． 加入xx微升中和液（Reagent F） 5． 上下倾倒数次，混匀 6． 室温下孵育5分钟 7． 加入xx微升缓冲液（Reagent D） 8． 室温下孵育60分钟 9． 加入xx微升反应液（Reagent H） 10． 加入xx微升染色工作液 11． 上下倾倒数次，混匀 12． 室温下孵育30分钟 13． 即刻放进荧光分光光度仪检测（激发波长365nm，散发波长430nm）：获得背景对照相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 四、 样品测定 1． 移取xx微升缓冲液（Reagent D）到新的比色皿 2． 加入10微升上述配制的待测样品 3． 加入xx微升淬灭液（Reagent E） 4． 加入xx微升中和液（Reagent F） 5． 上下倾倒数次，混匀 6． 室温下孵育5分钟 7． 加入xx微升还原液（Reagent G） 8． 室温下孵育60分钟 9． 加入xx微升反应液（Reagent H） 10． 加入xx微升染色工作液 11． 上下倾倒数次，混匀 12． 室温下孵育30分钟 13． 即刻放进荧光分光光度仪检测（激发波长365nm，散发波长430nm）：获得标准样品相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 14． 实际荧光读数：待测样品相对荧光单位—背景对照相对荧光单位 15． 根据标准曲线获得样品对应氧化型谷胱甘肽浓度（纳摩尔/升） 16． 计算样品实际氧化型谷胱甘肽浓度 注意事项 1． 本产品为50次操作，包括标准样品 2． 本产品的检测敏感度达20皮摩尔/升 3． 操作时，须戴手套 4． 如果样品制备后， 建议即可测定，长不得超过4周，保存在－70℃冰箱里 5． 样品中避免含有各种还原性化学物质，包括巯基乙醇（2－mercaptoethanol）、二硫苏糖醇（dithiothreitol；DTT）、半胱氨酸（cysteine）和N-乙基顺丁烯二酰亚胺（N-Ethylmaleimide；NEM）等 6． 样品中避免含有含铁性化学物质，以及血液成分污染 7． 样品氧化型谷胱甘肽浓度范围不清楚，建议进行系列稀释样品2至3次 8． 如果用户可以使用激发波长340至370nm；散发波长410至460nm的波长范围 9． 荧光测定后，比色皿须清洗 10． 如果待测样品浓度过高，可以稀释样品 11． 如果待测样品浓度过低，可以浓缩样品或延长孵育时间至60分钟 12． 本公司提供系列谷胱甘肽分析试剂产品 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
