主要用途
细菌醛酮还原酶（aldo-keto reductase）总活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过通用底物对硝基苯甲醛或木糖，在醛酮还原酶的作用下，产生醇类分子，伴随着还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化反应后峰值的变化，即采用比色法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌裂解悬液样品中醛酮还原酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
保存方式 保存在－20℃冰箱里；底物液（Reagent E）避免光照；有效期 6月 用户自备 1.5毫升离心管：用于样品保存的容器 15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器 （微型）台式离心机：用于样品操作 比色皿或酶标板：用于比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 实验开始，将－20℃冰箱里的试剂盒中的裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后进行下列操作。 一、 样品准备 1． 准备好10毫升待测的细菌放进37℃摇床孵育16小时，速度为220RPM 2． 移取500微升过夜培养的细菌到15毫升锥形离心管 3． 加入用户自备的10毫升新鲜培养液和诱导剂 4． 放进37℃摇床孵育2小时，速度为220RPM（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升） 5． 置于冰槽里5分钟 6． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g 7． 小心抽去上清液 8． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀 9． 转移到预冷的1.5毫升离心管 10． 加入xx微升活性液（Reagent B） 11． 强力涡旋震荡15 12． 置于冰槽里15分钟 13． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415） 14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管 15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1） 16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作 二、 测定准备 1． 开启并设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长340nm，间隔60，读数6次（共5分钟），并置零 2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；缓冲液（Reagent C）室温下预热均衡；底物液（Reagent E）避免光 三、 背景对照测定 1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿 2． 加入xx微升反应液（Reagent D） 3． 加入xx微升底物液（Reagent E） 4． 上下倾倒数次，混匀 5． 在30℃温度下孵育3分钟 6． 加入xx微升阴性液（Reagent F） 7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3之内） 8． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（0分钟读数－5分钟读数） 四、 样品测定 1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿 2． 加入xx微升反应液（Reagent D） 3． 加入xx微升底物液（Reagent E） 4． 上下倾倒数次，混匀 5． 在30℃温度下孵育3分钟 6． 加入50微升待测样品（100微克蛋白）（注意：样品须清澈） 7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3之内） 8． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（0分钟读数－5分钟读数） 五、计算样品活性 注意事项 1． 本产品为20次（比色皿）和80次（酶标板）操作，包括背景对照 2． 操作时，须戴手套 3． 系统操作过程中，背景测定只需1次 4． 建议使用比色皿测定 5． 样品须澄清，至关重要 6． 加样后3内比色测定 7． 测定值由高到低变化；测定可持续5分钟 8． 比色测定后，比色皿须清洗充分 9． 样本测定5分钟读数低于0分钟读数表明具有酶活性 10． 建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升；如果样本酶活性过低或过高， 则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1） 11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度 12． 醛酮还原酶单位活性定义为：在30℃，pH 6.8条件下，每分钟内能够转化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）所需的酶量作为一个活性单位 13． 本公司提供系列经典细胞激酶检测试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定检测敏感 原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司 |
