细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃ 离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

3. 丙酮酸钠标准液：取 100µL 标准液，倍比稀释至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。

二、测定操作表：

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定

试剂名称(µL)	测定管	对照管	标准管
待测样本	10	10	-
标准液	-	-	10
试剂一	50	50	50
试剂二	10	-	-
蒸馏水	-	10	10

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 15min

充分混匀，室温静置 3min，取200µL 转移至微量玻璃比色皿或在 96 孔板中，450 nm 下测定吸光度，计算∆A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照。

根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y 为标准品浓度，µmol/mL；x 为对吸光度（减去浓度为0 的标准管的OD 值）。

LDH 活力单位计算：

1. 计算样品丙酮酸的含量，即将∆A 带入回归方程中（x），计算y 值

2. 血清（浆）LDH 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mL）=y×V 样÷V 样÷T×103=66.7×y

3. 细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/mg prot）= y×V 样÷（Cpr×V 样）÷T×103=66.7×y÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/g 鲜重）= y×V 样÷（W÷V 样总×V 样）÷T×103=66.67×y÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。

LDH（U/104 cell）= y×V 样÷（500÷V 样总×V 样）÷T×103=0.133×y

V 样：反应体系中加入的样本体积，10µL=0.01mL；V 样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数， 500 万；103：1µmol/mL=103nmol/mL。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司

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