注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 方法:可见分光光度法 货号: YX-C-TS 规格: 50T/48S 测定意义: 皂苷(Saponin)是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷,主要分布于陆地高等植物中,也少量存在于海星和海参等海洋生物中。许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等生物活性。 测定原理: 使用超声波提取样品中的皂苷,利用香草醛-高氯酸显色体系测定总皂苷含量。 所需的仪器和用品: 可见分光光度计、烘箱、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、高氯酸、乙酸、超声清洗器。 试剂的组成和配制: 提取液:液体 50ml×1 瓶,4℃保存; 试剂一:12ml×1 瓶,4℃保存; 试剂二:高氯酸,自备; 试剂三:乙酸,自备。 总皂苷提取: 样本烘干,粉碎过筛,称取0.05g,加入1mL提取液,超声提取1h;8000g,25℃离心10min,取上清待测。 测定步骤 1、可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 589nm,蒸馏水调零。 2、测定管:取0.5mL上清,70℃挥发至干。加入0.2mL试剂一和0.8mL试剂二,55℃水浴20min。吸取 200μL 加入1mL玻璃比色皿中,再加入1000μL试剂三,充分混匀后,589nm下测定吸光度A1。 3、空白管:取 0.5mL 提取液,70℃挥发至干。加入 0.2mL 试剂一和 0.8mL 试剂二,55℃水浴 20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中,再加入 1000μL 试剂三,充分混匀后,589nm 下测定吸光度 A2。计算△A= A1-A2。 总皂苷含量计算: 1.以齐墩果酸为对照品计算 标准状态下的回归曲线为:y=0.0072x-0.012,R2 =0.9968,x为对照品浓度,μg/mL,y 为吸光度△A。 总皂苷含量(μg/g 干重)=(△A+0.012)÷ 0.0072×V 样÷(V 样÷V 样总×W) =138.89×(△A+0.012)÷W 2.以人参皂苷 Re 为对照品计算 标准状态下的回归曲线为:y=2.0466x-0.0016,R2=0.9983,x为对照品浓度,mg/mL,y 为吸光度△A。
总皂苷含量(μg/g 干重)=(△A+0.0016)÷ 2.0466×V 样÷(V 样÷V 样总×W)×1000 =488.62×(△A+0.0016)÷W V 样:加入样本体积,0.5mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本干重,g;1000, 毫克到微克的换算系数。 原创作者:青岛捷世康生物科技有限公司 |